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大腸桿菌的培養(yǎng)和分離生物教案
作為一名教學(xué)工作者，很有必要精心設(shè)計(jì)一份教案，教案是教學(xué)活動(dòng)的總的組織綱領(lǐng)和行動(dòng)方案。那要怎么寫好教案呢？以下是小編為大家整理的大腸桿菌的培養(yǎng)和分離生物教案，希望對(duì)大家有所幫助。
大腸桿菌的培養(yǎng)和分離生物教案1
——基礎(chǔ)知識(shí)和操作過程梳理
一、大腸桿菌
細(xì)菌是單細(xì)胞的原核生物。細(xì)菌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)等。細(xì)菌無成型的細(xì)胞核，細(xì)胞壁由肽聚糖組成。由于細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)不同，細(xì)菌可分為革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌兩類。革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁厚，無莢膜，多產(chǎn)生外毒素；革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁薄，有莢膜，多產(chǎn)生內(nèi)毒素。革蘭氏陽(yáng)性菌對(duì)青霉素更為敏感。
大腸桿菌是革蘭氏陰性、異養(yǎng)兼性厭氧型腸道桿菌。在腸道中一般對(duì)人無害，但任何大腸桿菌進(jìn)入人的泌尿系統(tǒng)，都會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。大腸桿菌在基因工程技術(shù)中被廣泛的應(yīng)用，它的質(zhì)粒是最常用的運(yùn)載體，它也是基因工程中常用的受體細(xì)胞。
二、培養(yǎng)基配置
微生物生命活動(dòng)過程中需要的化合物有碳源、氮源、生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽和水。有的化合物既是碳源又是氮源、能源。生長(zhǎng)因子是微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物，但不一定需要外界補(bǔ)充，有的微生物可以自身合成。在提供上述幾種主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)ph、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。
我們一般用lb液體培養(yǎng)基來擴(kuò)大培養(yǎng)大腸桿菌，培養(yǎng)后可在lb固體培養(yǎng)基上劃線分離。以下為本實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)基配置步驟：
1．稱量：準(zhǔn)確稱取各成分。蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化鈉0.5g，加水50ml。配置lb固體培養(yǎng)基時(shí)還需加1g瓊脂。
2．溶化：加熱熔化，用蒸餾水定容到50ml。配置lb固體培養(yǎng)基時(shí)還需加瓊脂，整個(gè)過程不斷用玻棒攪拌，目的是防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。
3．調(diào)ph：用1mol/l naoh溶液調(diào)節(jié)ph至偏堿性。
4．滅菌：在兩個(gè)250ml的三角瓶中分別裝入50ml lb液體培養(yǎng)基和50ml lb固體培養(yǎng)基，加上棉塞。將培養(yǎng)皿用牛皮紙包好，放入滅菌鍋內(nèi)，1kg壓力滅菌15min。
5．倒平板：滅菌后，待固體培養(yǎng)基冷卻至60℃左右時(shí)在酒精燈火焰附近操作進(jìn)行。其過程是：
①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁，右手拿裝有培養(yǎng)基的`三角瓶，左手拔出棉塞；
②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通過火焰；
�、塾米笫謱⑴囵B(yǎng)皿打開一條稍大于三角瓶口的縫隙，右手將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立刻蓋上皿蓋；
�、艽桨謇鋮s凝固后，將平板倒過來放置。
倒過來放置的目的是防止培養(yǎng)基冷卻過程中形成的水滴落到培養(yǎng)基表面。向培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)移已滅菌的培養(yǎng)基時(shí)，也不要把培養(yǎng)基沾在皿壁上。否則，空氣中雜菌會(huì)在這些粘附培養(yǎng)基上繁殖，并污染皿內(nèi)培養(yǎng)基。
三、滅菌和消毒
1．無菌技術(shù)：
�、賹�(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；
�、趯⑴囵B(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；
③為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行；
�、鼙苊庖褱缇幚淼牟牧嫌镁吲c周圍的物品相接觸。
2．消毒方法：
�、偃粘Ｉ罱�(jīng)常用到的是煮沸消毒法；
�、趯�(duì)一些不耐高溫的液體，則使用巴氏消毒法；
③對(duì)接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)首先噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強(qiáng)消毒效果，然后使用紫外線進(jìn)行物理消毒；
�、軐�(shí)驗(yàn)操作者的雙手使用酒精進(jìn)行消毒。
3．滅菌方法：
�、俳臃N環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；
�、谂囵B(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋；
③表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。
4．比較消毒和滅菌：
比較項(xiàng)
理化因素的作用強(qiáng)度
消滅微生物的數(shù)量
芽孢和孢子能否被消滅
消毒
較為溫和
部分生活狀態(tài)的微生物
不能
滅菌
強(qiáng)烈
全部微生物
能
5．注意事項(xiàng)：
�、賹�(shí)驗(yàn)中用的棉花不能用脫脂棉，因脫脂棉易吸水，吸水后容易造成污染。滅菌后，通常在60～80℃烘箱中除去滅菌時(shí)的水分；
�、谖锲费b入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后，要首先打開排氣閥，煮沸并排除鍋內(nèi)冷空氣，其目的是有利于鍋內(nèi)溫度升高，隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，加熱結(jié)束切斷熱源后，要使溫度自然降低，氣壓務(wù)必降至零時(shí)打開鍋蓋，其目的是防止容器中的液體暴沸；
③在用任何器皿轉(zhuǎn)接時(shí)，瓶塞和封口膜只能夾在手上，不許放在臺(tái)面上，接種時(shí)要在酒精燈火焰旁操作；
�、芘囵B(yǎng)基一定不能沾在三角瓶口、試管管口和培養(yǎng)皿壁上，否則容易污染；
⑤接種時(shí)要膽大心細(xì)，動(dòng)作快捷，這是減少污染的關(guān)鍵；
�、藿臃N后，培養(yǎng)皿必須倒放（蓋在下方）在恒溫培養(yǎng)箱中，如正放則水蒸氣在蓋上凝成水滴，滴到接種后的培養(yǎng)基表面，水流擴(kuò)散會(huì)使菌落擴(kuò)散，就很難形成單菌落了。
四、細(xì)菌的分離
1．劃線分離法：用接種環(huán)蘸菌液后在含有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿平板上劃線，在劃線過程中菌液逐漸減少，細(xì)菌也逐漸減少。劃線到最后，可使細(xì)菌間的距離加大。在培養(yǎng)10～20h后，可由一個(gè)細(xì)菌產(chǎn)生單菌落，菌落不會(huì)重疊。如果再將每個(gè)菌落分別接種至含有固體培養(yǎng)基的試管斜面上，在斜面上劃線，則每個(gè)斜面的菌群就是由一個(gè)細(xì)菌產(chǎn)生的后代。
其操作步驟是：將培養(yǎng)皿底部用拇指和無名指固定成傾斜狀態(tài)，在火焰旁將培養(yǎng)皿稍微打開。在此同時(shí)，用環(huán)狀接種針在火焰旁取少許菌懸液，迅速送入培養(yǎng)皿內(nèi)，在平板培養(yǎng)基的一邊，作第1次平行劃線3～5條，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70°角，用燒過冷卻的接種針，通過第1次劃線部分作第2次平行劃線，然后再用同樣方法，通過第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和通過第三次平行劃線部分作第四次平行劃線。劃線時(shí)，接種針應(yīng)與平板表面成30°角左右。不要使接種針碰到培養(yǎng)皿邊緣，也不要將培養(yǎng)基劃破。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于恒溫箱培養(yǎng)。
取菌種前灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上的微生物；除第一次劃線外，其余劃線前都要灼燒接種環(huán)的目的是消滅接種環(huán)上殘留菌種；取菌種和劃線前都要求接種環(huán)冷卻后進(jìn)行，其目的是防止高溫殺死菌種；最后灼燒接種環(huán)的目的是防止細(xì)菌污染環(huán)境和操作者。
2．涂布分離法：先將培養(yǎng)的菌液稀釋，通常稀釋到10－5～10－7之間，然后取0.1ml不同稀釋度的稀釋菌液放在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上，用玻璃刮刀涂布在培養(yǎng)基平面上進(jìn)行培養(yǎng)，在適當(dāng)?shù)南♂尪认�，可產(chǎn)生相互分開的菌落。通常每個(gè)培養(yǎng)皿有20個(gè)以內(nèi)的單菌落最為適合。將每個(gè)菌落分別接種在斜面上擴(kuò)增培養(yǎng)后，再做功能性實(shí)驗(yàn)。
劃線分離法，方法簡(jiǎn)單；涂布分離法，單菌落更易分開，但操作復(fù)雜些。細(xì)菌的兩種分離法各有優(yōu)點(diǎn),都可采用。
五、菌落和菌種種類的辨認(rèn)
單個(gè)細(xì)菌用肉眼是看不見的，但是，當(dāng)單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，便會(huì)形成一個(gè)肉眼可見的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。不同種類的細(xì)菌所形成的菌落在大小、形狀、顏色、光澤度、透明度等方面具有一定的特征。
細(xì)菌的菌落表面一般是光滑而濕潤(rùn)的，有黏稠性，多數(shù)透明或半透明，但也有細(xì)菌的菌落表面是干燥、有褶皺的；放線菌由于有纖細(xì)的菌絲并可產(chǎn)生孢子，所以菌落表面是緊密的絨狀、堅(jiān)實(shí)多皺，長(zhǎng)孢子后就成粉末狀，由于菌絲和孢子有多種色素，所以在菌落培養(yǎng)基底部和菌落表面都有不同的顏色，菌落不易用接種環(huán)挑動(dòng)；酵母菌落類似于細(xì)菌菌落，表面光滑而濕潤(rùn)，有黏稠性但大多呈乳白色，少數(shù)呈紅色。如果菌落無法辨認(rèn)，只有借助于顯微鏡觀察。在顯微鏡下細(xì)菌一般為桿狀、球狀和弧狀，直徑都在1um左右；放線菌菌絲是沒有橫隔的分枝絲狀體，氣生菌絲頂端分裂成串狀孢子，孢子絲有直線形、螺旋狀、彎曲式或輪生等；酵母有卵圓型或絲狀，但卵圓形細(xì)胞大于細(xì)菌，直徑約5~7um。
大腸桿菌的培養(yǎng)和分離生物教案2
一、大腸桿菌
1．大腸桿菌屬于革蘭氏________性菌，為________型的腸道桿菌。
2．結(jié)構(gòu)：屬于________生物。
3．用途：是在________技術(shù)中被廣泛采用的工具。
4．與人類的關(guān)系：它生活在人類的________中，一般對(duì)人________(“有”還是“無”)害。有一些菌株對(duì)人體能產(chǎn)生危害，因?yàn)樗鼈兛梢郧治g________并產(chǎn)生________。任何大腸桿菌如果進(jìn)入人的________系統(tǒng)，都會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。
答案：
1.陰 兼性厭氧
2．原核
3．基因工程
4．腸道 無 腸黏膜 毒素 泌尿
二、細(xì)菌的培養(yǎng)和分離
1．細(xì)菌的培養(yǎng)：
(1)細(xì)菌的繁殖：細(xì)菌以________的方式繁殖，分裂速度很快，約________分裂一次。
(2)培養(yǎng)細(xì)菌的方法：培養(yǎng)細(xì)菌，需要將________________________________________________________________________
轉(zhuǎn)移到________中，一般用________來轉(zhuǎn)移帶菌的培養(yǎng)物。
(3)用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌的差別：
接種后，培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基類型 接種方法 接種后培養(yǎng)的時(shí)間(單位：小時(shí)) 培養(yǎng)結(jié)果
液體培養(yǎng)基 接種環(huán)直接接種 培養(yǎng)8 h后 每毫升培養(yǎng)基中有________個(gè)細(xì)菌
固體培養(yǎng)基 用接種環(huán)在培養(yǎng)基上用________________________________________________________________________的方式接種(該法還可以用于______) 培養(yǎng)10～20 h后 一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞會(huì)繁殖成許多個(gè)細(xì)菌細(xì)胞，這些細(xì)胞________________________________________________________________________________，形成____________________________________________________________
2.細(xì)菌的分離：
(1)分離的方法與特點(diǎn)：分離細(xì)菌有________和________2種。前者方法簡(jiǎn)單，后者操作復(fù)雜，但是______________________________________________________________更易分開。
(2)本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行大腸桿菌分離，是用________法，就是在________培養(yǎng)基上進(jìn)行細(xì)菌的________。
答案：1.
(1)分裂 20 min
(2)已有細(xì)菌的培養(yǎng)物 新的培養(yǎng)基 接種環(huán)
(3)幾億 劃線 分離細(xì)菌 緊緊聚集在一起菌落
2.(1)劃線分離法 涂布分離法 單菌落
(2)劃線分離固體平面劃線培養(yǎng)
三、滅菌操作
1．滅菌操作的原因：為了獲得________的培養(yǎng)物，其關(guān)鍵是防止外來________的入侵污染。因此，在培養(yǎng)微生物時(shí)必須進(jìn)行________操作。
2．無菌操作的條件：
(1)首要條件是________必須是無菌的；
(2)________必須是無菌的；
(3)________的過程必須是無菌的等。
答案：1.純凈 雜菌 無菌
2．(1)各種器皿 (2)各種培養(yǎng)基 (3)菌轉(zhuǎn)移操作
四、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實(shí)驗(yàn)
1．實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>
(1)進(jìn)行大腸桿菌的________，利用________培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的操作；
(2)進(jìn)行大腸桿菌的________，用________培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌的________培養(yǎng)；
(3)說明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和操作要求的原理。
2．實(shí)驗(yàn)步驟
(1)滅菌：用________在________壓力下對(duì)LB液體培養(yǎng)基、LB固體培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌________min。
(2)自________向________中轉(zhuǎn)移并分裝固體培養(yǎng)基：
待冷卻至______左右，將三角錐形瓶中的______培養(yǎng)基，在______上分裝至幾個(gè)______中，制成______培養(yǎng)基。
(3)將大腸桿菌自________轉(zhuǎn)移到________中的________培養(yǎng)基中培養(yǎng)：
將大腸桿菌用________在無菌操作下接種至三角錐形瓶中的________培養(yǎng)基中，在________搖床振蕩培養(yǎng)________，完成大腸桿菌的培養(yǎng)。
(4)將菌液在________培養(yǎng)基上進(jìn)行________分離：
從前一步培養(yǎng)得到的菌液中獲取菌種，用________以__________法接種至第二步所制得的__________培養(yǎng)基中，在________℃恒溫箱中培養(yǎng)________h后觀察菌落。
(5)菌種保存：
在無菌操作下將________用________取出，再用________法接種在________上，________培養(yǎng)________后，________冰箱保存。
3．分離實(shí)驗(yàn)的結(jié)果及相應(yīng)結(jié)論：
觀察中若看到在________的末端出現(xiàn)________，則表明菌已被分離了。
4．大腸桿菌分離的用途：________的通用方法，也是用于________的最簡(jiǎn)便方法之一。
答案：1.(1)擴(kuò)增 液體 (2)分離 固體平面 劃線
2．(1)高壓鍋 1 kg 15 (2)三角瓶 培養(yǎng)皿 60 ℃
固體 超凈臺(tái) 培養(yǎng)皿 固體平面 (3)斜面 三角瓶 液體
接種環(huán) 液體 37 ℃ 12 h (4)固體平面 劃線 接種環(huán)
劃線 固體平面 37 12～24 (5)單菌落 接種環(huán) 劃線 斜面 37 ℃ 24 h 4 ℃
3．劃線 不連續(xù)的單個(gè)菌落
4．消除污染雜菌 篩選高表達(dá)量菌株
核心解讀
1．微生物、細(xì)菌與大腸桿菌之間有怎樣的關(guān)系？
(1)概念內(nèi)涵：其關(guān)系圖解見下
(2)結(jié)構(gòu)上：三者都是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，形體微小的生物，但是從細(xì)胞角度看其結(jié)構(gòu)是不同的，具體如下：
2．培養(yǎng)大腸桿菌的LB培養(yǎng)基中有各種物質(zhì)，為什么選擇這些物質(zhì)，這些物質(zhì)有什么作用呢？
(1)人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出了供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)——培養(yǎng)基。雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有五大營(yíng)養(yǎng)要素，即水、無機(jī)鹽、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)和生長(zhǎng)因子(不同的細(xì)菌需要的各不相同，有物種差異，它主要補(bǔ)充自身不能合成的或合成能力較弱的，但卻是生長(zhǎng)繁殖必需的物質(zhì))。見下表：
微生物的營(yíng)養(yǎng)要素 定義 功能 類型 化合物類型 常用物質(zhì)
碳源 凡可構(gòu)成微生物細(xì)胞和代謝產(chǎn)物中碳架來源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)稱為碳源 構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)，供給微生物生長(zhǎng)發(fā)育所需要的能量 無機(jī)碳(自養(yǎng)型微生物用) 無機(jī)物 CO2、NaHCO3、CaCO3等
有機(jī)碳(異養(yǎng)型微生物用) 蛋白質(zhì)、核酸類 牛肉膏、蛋白胨、花生粉餅、明膠、氨基酸等
糖類脂質(zhì)等 葡萄糖、蔗糖、淀粉等
氮源 凡是構(gòu)成微生物的細(xì)胞物質(zhì)或代謝產(chǎn)物中氮素來源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)稱為氮源 主要是提供合成原生質(zhì)和細(xì)胞其他結(jié)構(gòu)的原料，一般不作能源 無機(jī)氮 銨鹽 NH3、(NH4)2SO4
硝酸鹽 KNO3
N2 空氣
有機(jī)氮 牛肉膏、蛋白胨、醇母膏、尿素、明膠等
生長(zhǎng)因子 一類對(duì)微生物正常代謝必不可少且又不能從簡(jiǎn)單的碳、氮源自行合成的所需極微量的有機(jī)物 一般是酶和核酸的組成成分 酵母膏、玉米漿、黃豆餅粉、動(dòng)植物組織液、麥芽汁等，復(fù)合維生素
水 作用：組成成分；反應(yīng)介質(zhì)；物質(zhì)運(yùn)輸媒體；熱的良導(dǎo)體
無機(jī)鹽 作用：維持滲透壓、pH等
(2)大腸桿菌的LB培養(yǎng)基
微生物的營(yíng)養(yǎng)要素 本實(shí)驗(yàn)中大腸桿菌LB培養(yǎng)基配方 培養(yǎng)基配方與微生物營(yíng)養(yǎng)要素的對(duì)應(yīng)關(guān)系
LB液體培養(yǎng)基 LB固體培養(yǎng)基
氮源、
碳源、
無機(jī)鹽、
生長(zhǎng)因子、
水
瓊脂1 g
蛋白胨0.5 g 主要提供大腸桿菌的氮源、碳源需求
酵母提取物0.25 g 主要提供生長(zhǎng)因子
NaCl 0.5 g 提供無機(jī)鹽
水 50 mL 提供水
(3)此外配方中還要注意pH等。
3．該實(shí)驗(yàn)中這些操作的原因
(1)三角錐形瓶中的LB固體培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到60 ℃左右時(shí)，才用來轉(zhuǎn)移和分裝，制成固體平面培養(yǎng)基，為什么？你用什么簡(jiǎn)易方法快速估計(jì)該溫度？
因?yàn)槿清F形瓶中的LB固體培養(yǎng)基中有瓊脂，它在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，當(dāng)冷卻到60 ℃左右時(shí)，不會(huì)因溫度過高燙手而不易操作；也不會(huì)因?yàn)闇囟冗^低而使三角錐形瓶中的培養(yǎng)基凝固，最終無法轉(zhuǎn)移分裝制成新的平面培養(yǎng)基。
簡(jiǎn)易估計(jì)溫度的方法：可以用手觸摸滅菌后的三角錐形瓶，感覺錐形瓶由燙手轉(zhuǎn)為剛剛不燙手時(shí)，則說明已經(jīng)冷卻到60 ℃左右了。
(2)進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時(shí)，為什么要將培養(yǎng)皿倒置？
恒溫培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中的水分會(huì)以水蒸氣的形式蒸發(fā)，倒放培養(yǎng)皿則會(huì)使水蒸氣凝結(jié)成水滴留在蓋子上；如果正放培養(yǎng)皿，則水分形成的水滴會(huì)落入培養(yǎng)基表面并且擴(kuò)散開。如果培養(yǎng)皿中已形成菌落，則菌落中的菌會(huì)隨水?dāng)U散，菌落間相互影響，很難再分成單菌落，達(dá)不到分離的目的，培養(yǎng)皿中的菌落還有可能被蓋子上掉落的水給污染。
(3)將大腸桿菌用接種環(huán)自斜面轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，為什么接種環(huán)必須先深入到斜面冷卻后，才能再取斜面上的菌體？
接種環(huán)在取菌體前曾在酒精燈火焰上灼燒滅菌，一直灼燒至紅，溫度很高，若不冷卻就直接用其取斜面上的菌體，菌體可能因?yàn)榻佑|高溫接種環(huán)而死亡，導(dǎo)致大腸桿菌的轉(zhuǎn)移培養(yǎng)失敗。
(4)用劃線法分離大腸桿菌中，第一次和隨后的幾次劃線前都要灼燒接種環(huán)，它們的原因一樣嗎？在劃線結(jié)束后仍然要灼燒接種環(huán)這又是為什么呢？
雖然每次灼燒都是為了滅菌，但所滅的菌種和原因卻不一樣。
灼燒接種環(huán)的時(shí)間 消滅的菌體 原因
第一次劃線前 其他雜菌 防止其他雜菌的侵入而造成污染
隨后的幾次劃線前 上次劃線結(jié)束后殘留在接種環(huán)上的實(shí)驗(yàn)菌(本實(shí)驗(yàn)為：大腸桿菌) 為了使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌來自上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，最終獲得單個(gè)菌落，實(shí)現(xiàn)菌的分離
最后一次劃線結(jié)束后 為了防止實(shí)驗(yàn)菌殘留于接種環(huán)而污染環(huán)境和感染實(shí)驗(yàn)人員
(5)用劃線法分離大腸桿菌時(shí)，每次的劃線是怎么樣的？對(duì)隨后的劃線的起點(diǎn)有什么要求？為什么這樣要求呢？
每一次的劃線 依次的2次劃線之間的關(guān)系 各次劃線的分布
圖形輔助理解
劃線的要求 不能出現(xiàn)線條的重疊 第二次以及隨后的.劃線操作，總是從上一次劃線的末端開始 不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連
這樣要求的原因 使線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少 因?yàn)閯澗�后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到有單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的單菌落 若相連，則可能最后一次劃線末端處的細(xì)菌與第一次的疊加，細(xì)菌的數(shù)目不是最少的，不能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終將很難獲得單菌落
4．消毒與滅菌一樣嗎？
概念 常用方法 應(yīng)用的范圍
消毒 使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 煮沸消毒法：在100 ℃煮沸5～6 min 一般物品
巴氏消毒法：70～75 ℃煮30 min或在80 ℃煮15 min 對(duì)于一些不耐高溫的液體，如牛奶
化學(xué)藥劑消毒法 如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等
滅菌 使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物(包括芽孢和孢子) 灼燒滅菌：酒精燈火焰 接種工具的滅菌
干熱滅菌：160～170 ℃下滅菌1～2 h 玻璃器皿、金屬工具的滅菌
高壓蒸汽滅菌：121 ℃條件下，滅菌15～30 min 培養(yǎng)基及容器的滅菌
5.本實(shí)驗(yàn)中還需要了解哪些基礎(chǔ)知識(shí)才更便于掌握和理解呢？
(1)牛肉膏蛋白胨的知識(shí)
牛肉膏和蛋白胨來源于動(dòng)物原料，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
1 000 mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成
培養(yǎng)基組分 提供的主要營(yíng)養(yǎng)
牛肉膏 5 g 碳源、磷酸鹽和維生素
蛋白胨 10 g 氮源和維生素
NaCl 5 g 無機(jī)鹽
H2O 定容至1 000 mL 氫元素、氧元素
(2)巴氏消毒法的知識(shí)
巴氏消毒法也稱做低溫消毒法。
日常生活中經(jīng)常用到煮沸消毒法。在100 ℃煮沸 5～6 min 可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢。對(duì)于一些不耐高溫的液體，如牛奶，則使用巴氏消毒法，在70～75 ℃煮30 min或在80 ℃煮15 min，可以殺死牛奶中的微生物，并且使牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。
題例領(lǐng)悟TILILINGWU
【例題1】 下列操作屬于滅菌的是( )
A．用酒精擦拭實(shí)驗(yàn)人員的雙手
B．用氯氣處理水源
C．將接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒至紅
D．殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物
解析：此題考查對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)中滅菌的理解。對(duì)微生物培養(yǎng)來說，滅菌操作十分重要，其目的就是為了獲得純凈的培養(yǎng)物，其關(guān)鍵是防止外來一切雜菌的入侵，不僅僅是對(duì)人體有害的微生物。滅菌操作一般使用強(qiáng)烈的物化因素(如：灼燒滅菌、高壓蒸汽滅菌等)。而不是使用較為溫和的物化方法。
答案：C
消毒與滅菌是不同的。兩者除了在物化手段上是否強(qiáng)烈外，所消滅的微生物內(nèi)容也是不同的。滅菌是消除一切雜菌，而消毒僅僅殺死對(duì)人體有害的微生物。消毒往往無法消滅微生物的芽孢和孢子。
【例題2】 下列關(guān)于平板劃線的操作及敘述，正確的是 …
( )
A．灼燒接種環(huán)之后，為避免其他雜菌的干擾，應(yīng)立即伸入菌液取菌種
B．劃線結(jié)束后，為避免實(shí)驗(yàn)菌污染環(huán)境和感染操作者，所以必須再次灼燒接種環(huán)
C．在第一次劃線前灼燒接種環(huán)和每次劃線前灼燒接種環(huán)的目的相同
D．劃線時(shí)最后一區(qū)域一定要與第一區(qū)域相連，達(dá)到首尾相接
解析：此題考查對(duì)劃線法分離大腸桿菌的掌握。這是本實(shí)驗(yàn)的一大重點(diǎn)和難點(diǎn)。A的操作是錯(cuò)誤的，灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后方能取菌種，以免溫度太高殺死菌種。B的操作完全正確。C的敘述是錯(cuò)誤的，它們的灼燒目的完全不同，第一次劃線前的灼燒是為了殺死其他雜菌，保證實(shí)驗(yàn)菌的純凈，而隨后的灼燒卻是為了殺死殘留于接種環(huán)上的實(shí)驗(yàn)菌，保證實(shí)驗(yàn)菌隨劃線次數(shù)的增加而減少，每次劃線的菌種來自上一次劃線的末端。D的操作也是不正確的，不應(yīng)該相連，這樣才能使最后一次劃線不受第一次劃線的干擾。
答案：B
大腸桿菌的分離所采用的就是劃線分離法。這一方法十分重要。我們不僅要知其每一步具體的操作，還要知其所以然，還要關(guān)注注意事項(xiàng)，避免踏入誤區(qū)。
隨堂訓(xùn)練SUITANGXUNLIAN
1細(xì)菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌( )
A．接種針、手、培養(yǎng)基 B．高壓鍋、手、接種針
C．培養(yǎng)基、手、接種針 D．接種針、手、高壓鍋
答案：C 解析：滅菌是微生物培養(yǎng)過程中的重要環(huán)節(jié)。其中高壓蒸汽是為了殺滅培養(yǎng)基中的雜菌；酒精擦拭雙手，是滅手上的雜菌；而接種針在火焰上灼燒，就是為了滅接種針上的菌。故C選項(xiàng)是正確的。
2下列關(guān)于倒平板的操作姿勢(shì)的敘述中，正確的是( )
A．右手無名指及小指夾持含有固體培養(yǎng)基的三角瓶封口膜
B．右手大拇指、食指拿著三角瓶
C．左手拿著培養(yǎng)皿，蓋子放于桌子上
D．倒平板時(shí)，為防止溫度過高，暫時(shí)熄滅酒精燈
答案：A 解析：倒平板技術(shù)是微生物技術(shù)中的基本技術(shù)。只有A是正確的。B中手指姿勢(shì)錯(cuò)誤。C錯(cuò)在培養(yǎng)皿蓋放在桌上了。D中熄滅酒精燈不對(duì)，整個(gè)過程都需在酒精燈火焰旁完成。